prata coloidal verdadeira

TRATANDO CANDIDIASE DE REPETIÇÃO COM A PRATA COLOIDAL

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A candidíase é uma infecção ginecológica causada pelo fungo da cândida, geralmente cândida albicans, mas algumas vezes pode ocorrer de outras espécies não albicans como: glabrata, tropicalis, krusei, parapsilosis e saccharomyces cerevisae. Para saber qual espécie afetou você e fazer o tratamento medicamentoso correto junto ao seu médico, você precisa fazer um exame para identificar o tipo de fungos. 

Também pode causar infecção na pele, unhas, garganta, intestino, boca e corrente sanguínea. Mas fiquem tranquilas porque, quando isso acontece, a candidíase já acometeu aquele local em específico. A cândida que você pode ter na genital não irá se espalhar para esses lugares. 

A cândida causa Coceira, Dor na região, Vermelhidão, Corrimento vaginal branco e espesso, algumas vezes semelhante à nata. 

TIPOS 

Candidíase vaginal. … 

Candidíase masculina (balanopostite) 

Candidíase oral. … 

Candidíase de esôfago. … 

Candidíase na pele (Intertrigo) 

Candidíase invasiva. 

Dentre inúmeras causas temos: 

– Falta de higiene 

– Limpeza incorreta após defecar 

– Queda imunológica 

– Uso de hormônios e antibióticos que fazem cair a imunidade 

– Alteração de PH vaginal por conta de stress, alimentação e medicação. 

– Contaminação por relação sexual ou alteração de PH. 

– Deficiências minerais e vitamínicas que fazer o sistema imunológico cair. 

Sabemos que tem haver com o PH vaginal e imunidade de cada mulher, mas o que afeta o PH vaginal e a imunidade? Por trás de toda a fisiologia humana, existem comportamentos, pensamentos e hábitos que interferem. 

Tem sido cada vez mais comprovado que o estresse é o causador de muitas doenças. Todas as outras emoções também têm igual importância para o desenvolvimento de enfermidades, disfunções ou manifestações sintomáticas no corpo. 

No caso da candidíase, as emoções que podem ocasionar a infecção são: 

– Sensação de dispersão, frustração e/ou raiva; 

– Se sentir obrigada a ter que estar em alguma posição que não gostaria, como em um emprego que tem suas vantagens e paga as contas, mas não te faz se sentir bem mais; 

– Exigências abusivas nas relações; 

– Desconfiança dentro do relacionamento; 

– Não se adaptar ao sexo da pessoa; 

– Sentir-se obrigada a ter relação sexual sem estar com vontade ou sentir vontade e não fazer; entre outros. 

Dessa forma, não basta usar a prata coloidal, é preciso ir mais além observando a alimentação, seus hábitos e emoções e tudo que pode causar queda imunológica e alteração do Ph da região vaginal, do contrário, nem a prata e nem Deus podem te ajudar se você não mudar. 

COMO USAR A PRATA 

INGERIR 

Prata de 20ppm : 15 ml dia para uma média de peso de 70 kilos, de 20 a 60 dias ou mais + mudança de hábitos. 

Pode fazer duchas vaginais com a prata de 100ppm uma vez ao dia em casos mais severos. 

Borrifar a prata de 100 ppm nas roupas intimas e deixar secar, também pode usar no enxague. 

ONDE COMPRAR
Caso deseje temos a prata individual e um kit: 

20 ppm: https://produto.mercadolivre.com.br/MLB-1359962669-prata-coloidal-20-ppm-1l-naturals-pronta-ingerir-promoco-_JM?quantity=1&variation=460843569

100 ppm: https://produto.mercadolivre.com.br/MLB-1359967694-prata-coloidal-naturals-brazil-100-ppm-1li-adaptar-a-dose-_JM?quantity=1&variation=46084481462

20 E 100 PPM: https://produto.mercadolivre.com.br/MLB-1361062581-prata-coloidal-20-ppm-1l-1l-de-100ppm-naturals-brazil-_JM
LOJA:https://www.naturalsbrazil.com.br/prata-coloidal-1-litro 

Você tem direito a um frasco spray 30 ml spray, spray nasal ou gotas por litro. Só avisar que precisa para ser enviado, se caso não disser nada não será enviado.

CÂNCER E A MAIORIA DAS DOENÇAS SÃO CAUSADAS POR BACTÉRIAS

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CÂNCER E A MAIORIA DAS DOENÇAS SÃO CAUSADAS POR BACTÉRIAS

MICROZIMAS SEGUNDO O CIENTISTA ANTOINE BECHAMP SE TRANSFORMAM EM BACTÉRIAS

Por Alan Cantwell, MD

3-17-17

Há um século e meio, Bechamp declarou que o microzima é a unidade essencial da vida. Como médico, microscopista e citologista (especialista no estudo de células), observou minúsculos corpos granulares redondos dentro das células que brilhavam como pequenos brilhos de luz refratada. Ele não foi o primeiro a ver os grânulos, mas foi o primeiro a suspeitar que esses “pequenos corpos” poderiam ter a chave para a origem da vida. Outros cientistas que observaram essas formas os denominaram “corpúsculos cintilantes” e “granulações moleculares”. Bechamp explorou a natureza e a função desses grânulos contidos em todas as células humanas.

Ele os estudou em várias doenças. Na tuberculose (TB), as células não saudáveis ​​continham grandes números desses grânulos. Sua formação acadêmica variada em medicina, química e física, e sua especialização no uso de luz polarizada, permitiram que ele desenvolvesse experimentos biológicos únicos. Por fim, ele mostrou que as microzimas são pequenas fábricas químicas que têm a capacidade de fermentar. As microzimas foram nomeadas após palavras gregas que significam “pequeno” e “fermentado”.

Os testes químicos provaram que os microzimas eram insolúveis em água; e composto de hidrogênio, carbono e outros elementos, e produziu ácido nucléico. Quando aquecidas a altas temperaturas, perdem a capacidade de fermentar. As microzimas estavam vivas e repletas de energia quimicamente ativa. Bechamp declarou que eles eram elementos celulares anatômicos essenciais e indispensáveis ​​que digeriam, transformavam e assimilavam os nutrientes exigidos pelas células. Ele tentou matá-los, mas eles se mostraram indestrutíveis. Eles estavam presentes na ameba, a menor forma de vida animal; e dentro das menores formas de vida vegetal. Microzimas de cada órgão comportaram-se diferentemente umas das outras com diferentes propriedades bioquímicas. As microzimas nos órgãos dos jovens diferiam bioquimicamente das pessoas idosas.

A transformação de microzimas em bactérias

Bechamp fez uma tremenda descoberta científica. Sob certas condições (e por um processo conhecido como “evolução do vibrionen ”) ele observou que as microzimas se transformam em bactérias! Primeiro, ampliaram-se em formas cocóides redondas. Em seguida, os formulários redondos podem acoplar em duas ou mais unidades; ou eles podem brotar em formas de bactérias. Bechamp tinha certeza de que os “pequenos corpos” estavam envolvidos no processo de fermentação e na produção de doenças.

De onde vêm as microzimas? Ele surpreendeu o mundo científico ao declarar: “Eles são os restos organizados e ainda vivos de seres que viveram em eras passadas. Eles são os transmissores da hereditariedade. Dentro do material da cromatina do esperma humano estão contidos todos os grânulos microzimíneos necessários para reproduzir geneticamente todas as diferentes células essenciais para a reprodução da espécie humana ”.

Bechamp ensinou que toda vida surge das microzimas. Depois de muitos experimentos de laboratório e exames microscópicos desses grânulos, o médico-cientista alegou que as microzimas eram capazes de se desenvolver em organismos vivos comuns que recebem o nome de bactérias. Alguns destes estágios bacterianos intermediários foram considerados pelos especialistas como espécies diferentes, mas para Bechamp eles eram todos relacionados e derivados de microzimas.

Bechamp versus Pasteur

Antoine Bechamp (1816-1908) teve uma lista incrível de nomeações cientificas em universidades francesas: Doutor em Ciências, Doutor em Medicina, Professor de Química Médica e Farmácia em Montpelier, Professor de Física e Toxicologia em Estrasburgo. A lista continua e continua.

Durante sua vida, Bechamp foi ofuscado pelo icônico químico Louis Pasteur (1822-1895), o mais célebre cientista do século XIX. Ele é considerado o pai da microbiologia médica. E alguns o chamam de Pai da Medicina Moderna, um título bastante notável, pois Pasteur não era médico. Ambos os homens eram membros altamente respeitados da Academia Francesa de Ciências, e cada um apresentou suas descobertas científicas à Academia para revisão e publicação.

Como Bechamp frequentemente criticou o trabalho de Pasteur, uma intensa rivalidade e rivalidade entre os dois se intensificou na Academia. Mas não importava quão cuidadosamente Bechamp argumentasse contra alguns dos métodos científicos e conclusões de Pasteur, a Academia sempre dava a concordância a Pasteur.

Como químico, Pasteur não tinha as acreditações profissionais variadas de Bechamp nos campos da biologia, física e farmacologia. Apesar disso, ele alcançou grande fama ao salvar as indústrias francesas da cerveja, do vinho e do bicho-da-seda, e com a pesquisa de pasteurização e vacinas. Ele foi consumido com experimentos de fermentação e com a comprovação de que os “germes aéreos” eram a base para a doença humana, embora ele não fornecesse nenhuma explicação para a origem dos germes atmosféricos ou como a vida começou na Terra. Na visão de Bechamp, os “germes aéreos” de Pasteur não tinham nada a ver com a origem e a aparência dessas microzimas no tecido. De fato, ele escreveu que os germes aéreos de Pasteur provavelmente derivam de formas de vida agonizantes. Adicionando mais heresia ao dogma de Pasteur, Bechamp escreveu que, sem oxigênio, as microzimas não morrem – elas entram em um estado de repouso.

Embora Pasteur não tivesse a compreensão de Bechamp sobre patologia da doença, ele estabeleceu através de suas descobertas as conexões políticas essenciais que se estendiam tão alto quanto o imperador da França. Os tempos favoreciam Pasteur porque suas ideias estavam em sintonia com a ciência e a política de seus dias; e as idéias de Bechamp não eram.

Bechamp, apesar de seu brilhantismo, acabou sendo eclipsado pelo jovem Pasteur. Sua pesquisa pode ser explorada na edição inglesa de seu livro, O sangue e seu terceiro elemento anatômico , publicado postumamente em 1912. Os detalhes da acusação científica e as acusações de plágio podem ser encontradas no livro de Ethel Douglas Hume, Bechamp ou Pasteur? Capítulo Perdido na História da Biologia (1923). Notavelmente, ambos os livros ainda estão em impressão e disponíveis a partir de fontes de livros na Internet.

Microzimas e pleomorfismo bacteriano

Robert Koch, uma figura lendária em microbiologia por sua descoberta no final do século XIX de bactérias ácidas como a causa da tuberculose (TB), era rígido em sua crença de que um germe específico tinha apenas uma forma (monomorfismo). E ele se opôs a toda pesquisa mostrando que alguns germes tinham mais de uma forma (pleomorfismo) e complexos “ciclos de vida”. Assim, desde o início da bacteriologia havia conflito entre os monomorfistas e os pleomorfos, com a primeira dominando totalmente a segunda e dominando. microbiologia até hoje.

Na tentativa de “classificar” as bactérias cultivadas em laboratório como as formas mais baixas de vida conhecidas naquela época, não havia consideração dada a qualquer possível “conexão” entre qualquer uma das várias espécies de bactérias. O dogma era que um coccus permaneceu um coccus; uma vara permaneceu uma vara; e não houve interação entre eles. Também não houve “crossing over” de uma espécie para outra, e a pesquisa dos pleomorfistas sugerindo o contrário foi ignorada.

Quando os vírus foram descobertos, eles foram separados das bactérias, embora também se saiba que as bactérias são suscetíveis à infecção viral. Os vírus foram colocados em uma caixa; bactérias em outro. Como resultado, o número espetacular de formas microbianas pleomórficas “filtráveis” que formam uma ponte entre as bactérias “vivas” e os vírus “mortos” ainda não são estudados e não são considerados de grande importância na medicina clínica.

Graças a Pasteur, as bactérias “da pele” comuns, como cocos e bacilos, são frequentemente vistas como “contaminantes” de laboratório suspeitos ou “invasores secundários” ou “infecções oportunistas” de pouca importância como agentes etiológicos. Como resultado de todo esse dogma e rigidez, o pensamento médico foi completamente desligado para a possibilidade de que certos cânceres e doenças crônicas possam ser causados ​​por bactérias pleomórficas comuns originadas em células do próprio corpo. Portanto, a idéia de Bechamp de que bactérias poderiam surgir de células humanas danificadas era considerada absurda.

O legado de Bechamp

Bechamp descreveu os primeiros estágios das microzimas celulares como “grânulos”. Usando um microscópio de luz em sua maior potência, com uma ampliação de 1000 vezes. Eu não acho que ainda é possível apontar definitivamente para um único “grânulo” e afirmar que é um microzyma. Um estudo da patologia microscópica humana revela a presença de inúmeros grânulos no sangue e nos tecidos. No entanto, como as bactérias adequadamente coradas são visíveis nessa ampliação, elas podem ser identificadas. O surgimento de bactérias do sangue e tecidos associados ao câncer e a certas doenças crônicas foi descrito por vários pesquisadores (e sempre controversos) desde o surgimento da microbiologia no final da década de 1890, quando os médicos finalmente aceitaram os germes como uma causa da doença. Infelizmente, os médicos modernos ainda não aceitam bactérias que foram estudadas e relatadas em tecido canceroso e que alegam ser a causa do câncer. Alguns se opõem veementemente a tal crença.

Existem numerosos cientistas que têm uma dívida com Bechamp e sua alegação de que a doença humana tem suas raízes dentro das células do próprio corpo. As células estão danificadas. As microzimas dentro da célula reagem a esse dano. Micróbios se desenvolvem a partir de microzimas dentro das células danificadas, resultando em inflamação celular e produção de doenças.

Em 1890, William Russell, um renomado patologista escocês, descreveu “o parasita do câncer” que ele descobriu em todos os cânceres que examinou. O zoólogo alemão Gunter Enderlein (1872-1968) estudou aspectos dos micróbios que emanam das microzimas, rotulando-os como “protits” e descreveu um “ciclo de vida” para esses organismos pleomórficos. O microbiologista canadense Gaston Naessens (1924-) também estudou os ciclos de vida dos micróbios sanguíneos que ele define como “somatids” e outras formas. Com seu microscópio especialmente projetado capaz de microfotografia com lapso de tempo, o Royal Raymond Rife (1888-1971) foi o primeiro a visualizar diretamente os vírus e transformações de bactérias pleomórficas no tecido humano. Suas realizações científicas são recontadas por Jeff Rense em Rense.com

Indubitavelmente relacionado a Bechamp está a pesquisa sobre o câncer do notório Wilhelm Reich (1897-1957), cujos estudos e conclusões sobre

“bíons” e “bacilos T” derivados de células cancerígenas o colocaram em uma prisão americana onde ele morreu. Minha mentora, Virginia Livingston (1906-1990), junto com seus colegas de trabalho, passou a vida inteira pesquisando que o câncer era causado por bactérias pleomórficas de ácido-rápido. Para mais informações sobre esses dois médicos, veja ‘Virginia Livingston: Cancer Quack ou gênio médico?’ e ‘Dr. Wilhelm Reich: gênio científico – ou médico louco? em Rense.com

Apesar da crença geral de que o sangue humano normal e saudável é “estéril”, há cada vez mais evidências de que o sangue humano abriga bactérias normalmente, tanto na saúde quanto na doença. Estas bactérias foram determinadas como sendo bactérias estafilocócicas, estreptocócicas e semelhantes à da parede celular pleomórfica semelhante à das corinebactérias, algumas das quais são ácidas-rápidas. Para exemplos de visualização direta de descobertas microscópicas de bactérias em sangue normal, consulte o site de Tom Detwiler ( http://www.bloodmicrobe.org) .

Microzimas, grânulos e cocóides de tecido e bactérias deficientes na parede celular

Como as microzimas estão relacionadas à teoria bacteriana do câncer? De acordo com Livingston e outros, o germe do câncer é uma bactéria intra e extracelular que pode ser identificada pela coloração especial do tecido canceroso, particularmente a coloração ácido-rápida – uma mancha tradicionalmente usada para detectar bactérias da TB. As bactérias cancerígenas são pleomórficas, algumas das maiores “grandes formas corporais até mesmo atingindo o tamanho das células vermelhas do sangue. A forma mais comum no tecido é a forma granular (cocóide). No entanto, os patologistas não aceitam a ideia de que esses corpos de tecido são de natureza microbiana. Os corpos maiores às vezes são interpretados como “corpos de Russell” de origem duvidosa, mas nunca como “parasita de câncer” de Russell. (Para mais informações sobre grandes corpos, veja meu artigo on-line:

Figura 1. Secção de tecido corado com ácido (ácido-resistente) do sarcoma de Kaposi da pele relacionado com a SIDA. As setas apontam para uma coleção de formas e grânulos cocóides de tamanho variável (microzimas?) Na porção da derme da pele. Inserção mostra epiderme Staphylococcus Gram-manchada cultivada a partir do tumor. Observe o tamanho e a forma dos estafilococos em cultura de laboratório que parecem semelhantes às formas cocóides vistas no tumor. Ampliação x1000, em óleo.

Figura 2. Secção de tecido do cancro da mama mostrando um grupo de formas cocóides extracelulares de coloração variável. Compare o tamanho desses “grânulos” com o tamanho de um grupo de glóbulos vermelhos visto no canto superior direito. Fite stain, x1000, em óleo.

Figura 3. Seção de tecido do câncer de próstata mostrando uma célula carregada de formas cocóides intracelulares. Algumas das formas emanam da célula e se tornam extracelulares. Fite stain, x1000, em óleo.

Figura 4. Seção de tecido da doença de Hodgkin (linfoma) do pulmão mostrando uma célula com

grânulos intracelulares e formas cocóides (microzimas?). Coloração de Gram, x1000, em óleo.

Figura 5. Seção de autopsia de tecido conjuntivo de um caso fatal de doença de Hodgkin. As formas cocóides que saem da célula são

de tamanho variável (pleomórficas) e algumas das formas arredondadas maiores atingem o tamanho de “corpos grandes”. A mancha Fite, x1000, em óleo.

Se as bactérias evoluírem das microzimas dentro da célula, como Bechamp propôs, a primeira aparição seria a formação de grânulos e formas cocóides, intracelularmente. As cinco microfotografias seguintes mostram exemplos de como estes grânulos (formas cocóides microbianas) podem aparecer no tecido canceroso, como no sarcoma da pele de Kaposi relacionado com SIDA, cancro da mama, cancro da próstata e doença de Hodgkin (linfoma).

Bechamp e o futuro da ciência médica

Na virada do 21 st século um reconhecimento notável ocorreu. Os cientistas acreditam agora que a maioria das células do nosso corpo não são células humanas. Pelo contrário, estima-se que 50% das nossas células ou mais sejam células microbianas, principalmente bactérias. Existem mais de 37 trilhões de células em nossos corpos.

Que papel nossos trilhões de micróbios do corpo desempenham nas doenças crônicas do envelhecimento e no câncer? No momento, não sabemos. Nós agora reconhecemos que esses germes estão espalhados em vários tecidos e órgãos do corpo que já foram considerados estéreis. E o sangue contém bactérias que, sem dúvida, são transportadas para todas as células do corpo.

Então, por que os médicos se opõem tão fortemente quando um cientista conclui que as bactérias (e não os vírus) desempenham um papel no câncer? Os médicos não reconhecem bactérias no tecido canceroso? Seja qual for a resposta, o papel das bactérias no câncer terá que ser resolvido de uma vez por todas. Enquanto isso, continuamos ignorando a pesquisa sobre o micróbio do câncer em detrimento do paciente.

Pasteur foi o gênio do seu dia; e a teoria microzimiana e as visões contrárias de Bechamp eram um aborrecimento para a Academia. O estabelecimento médico sabia como lidar com rebeldes como Bechamp. Seu trabalho seria ignorado pelas “autoridades” e nunca citado pelos “especialistas”. Suas idéias nunca seriam levadas a sério em periódicos e livros didáticos. Os editores biomédicos expurgariam seu nome das páginas de suas publicações científicas. Bechamp desapareceria rapidamente dos anais da ciência. É assim que todos os rebeldes médicos são silenciados pelo estabelecimento.

Sugestão de leitura: (Estes artigos podem ser encontrados em http://www.Rense.com usando o mecanismo de busca do site)

Broxmeyer L e Cantwell A: AIDS: “É a bactéria, idiota!” (2008)

Cantwell A: O câncer é uma infecção causada por bactérias do tipo tuberculose. (2008)

Cantwell A: Todo o sangue humano está infectado com bactérias. (2007)

Cantwell A: As bactérias do tipo TB causam AIDS? (2007)

Cantwell A: Células HeLa Imortais e a contínua contaminação de pesquisas sobre câncer e vacinas. (2010)

Cantwell A: O ‘Star Cell’; O indicador microscópico de infecção bacteriana em câncer, AIDS e doença crônica. (2011)

[Alan Cantwell, MD é um dermatologista aposentado e pesquisador de câncer. Ele é o autor de The Cancer Micróbio e Quatro Mulheres Contra o Câncer , ambos disponíveis na Amazon.com]

Pierre Jacques Antoine Béchamp foi um químico e biólogo francês mais conhecido por ter sido um rival de Louis Pasteur. Wikipédia
Nascimento16 de outubro de 1816, Bassing, França
Falecimento15 de abril de 1908, Paris, França

MICROFIBRAS COM NANOPARTÍCULAS DE PRATA

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As novas Microfibras com seu toque macio, proporcionam conforto e proteção, sendo destinadas para o revestimento de palmilhas ou mesmo de òrteses em geral
Possuem um tratamento que acrescenta as fibras do tecido, Nano Partículas de Íons de Prata e Óleo de Cupuaçu que sob pressão e temperatura, liberam gradativamente os princípios ativos.
Íons de Prata – Ação
A imagem do microscópio eletrônico de varredura mostra uma Microfibra com revestimento das nano partículas de Íons de Prata.
 
Antimicrobiano Íons Prata
 
O efeito antimicrobiano da prata é reconhecido há muito anos. Este metal tem propriedades medicinais e vem sendo usada há mais de 2000 anos. Na antiguidade, a mesma era utilizada no tratamento de queimaduras e como agente quimioterápico contra patologias provocadas por bactérias, como a Staphylococcus aureus.
A atuação do antimicrobiano íons de prata se dá pelo contato direto das nano partículas com a membrana celular das bactérias. A Liberação de íons (Ag+) afeta as funções respiratórias das bactérias e também impedem a sua reprodução, reduzindo desta maneira o mau cheiro. Estas nanopartículas são ativas contra um amplo espectro de bactérias, incluindo cepas multirresistentes e fungos.
 
Óleo de Cupuaçu
 
Extraído da semente do fruto do Cupuaçu, fruta típica da região amazônica, pertencente a mesma família do Cacau.
O óleo extraído é rico em ácidos graxos, considerado um ótimo emoliente, possuindo uma agradável fragrância e alta capacidade de hidratação que combate a secura e proporciona elasticidade à pele.
 

PARA QUE SERVE A PRATA COLOIDAL

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A PRATA COLOIDAL VERDADEIRA SERVE PARA TODA PATOLOGIA OU AÇÕES QUE ENVOLVA VÍRUS, FUNGO E BACTÉRIA.

Como preventivo em períodos de epidemias, pandemias ou como tratamento único, complementar ou suplementar. Inibidor de algumas enzimas, bloqueador de substâncias.

OVOS E CISTOS DE VERMES (VERME ADULTO NÃO)

TESTANDO SUA PRATA COLOIDAL

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EFEITO THINDALL

Use um feixe de laser simples, colocando a sua prata num copo de vidro transparente, sem desenho e mirando o feixe no copo, você deve ver feixe atravessando a água, isso significa que temos coloides na suspensão, mas não sabemos se há prata iônica (que perdeu ion).

TESTE DO CLORETO DE SÓDIO (sal de cozinha)

Pegue 30 ml de prata coloidal que você adquiriu, coloque num copo de vidro transparente. Acrescente 10 a 15 grãos de sal de cozinha fino. Gire o copo suavemente e veja se começa a formar um nevoa branca.

Se sua prata se mantiver amarela, perfeito, se forma significa que houve uma reação química entre a prata iônica que é negativa e o cloreto que é positivo. Eles se uniram formando cloreto de prata que é altamente tóxico.

TESTE DA COR

Prata coloidal verdadeira é amarela, translucida e limpa sempre, até 100ppm (somente feita como método com sais). Outra coloração é indicio que pode haver prata iônica ou outros sais de prata.

Se for transparente deve fazer os outros testes e ver o sabor que deve ser amargo.

TESTE DO SABOR

– Prata transparente, amarga.

– Prata pelo método de aquecimento somente, sem sais, amarga

– Prata pelo método com sais, suavemente amarga conforme a quantidade de partículas (método que garante a eliminação da prata iônica pelo método Lee– Método de Meisel)
QUALQUER UM DOS TESTES FALANDO HÁ ALGO ERRADO COM SUA PRATA.

VALIDADE DA PRATA COLOIDAL

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Uma grande prata dos produtores de prata dá como validade da prata coloidal, prazo indeterminado, mas vamos analisar de forma lógica a questão.

A prata 1000, realmente tem prazo indeterminado, mas a prata coloidal é um processo, onde as partículas de prata, sem perder íon, são submetidas a um processo de eletrólise, no qual a prata é fragmentada em nano partículas. Sob condições adequadas da fonte, devem ser produzidas partículas no tamanho de 1 a 100 nanômetros, numa escala de coloide de coloração amarela.

Essas partículas carregadas de eletricidade tem uma vida útil de carga elétrica, assim como uma pilha, uma bateria, que com o passar do tempo, exposição a luz, ao ar, à temperatura, vai perdendo a carga, perdendo a eletricidade, concordam?

Processo natural. Se bem armazenada na embalagem original, em temperatura ambiente, não guardada na geladeira ou aquecida, não exposta a luz ou ao ar, pode manter até 1 ano sua eficácia até 80% em longo período.

Por isso, é errado dar um prazo de validade indeterminado a algo que pode ser alterado conforme submetida a variáveis.

Então fique atento e saiba que a prata coloidal é algo de muita eficácia, mas deve ser feita com muita responsabilidade.

DOSAGEM DE SEGURANÇA PARA A PRATA COLOIDAL

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Prata (CASRN 7440-22-4)

O  EPA diz que a dose suficiente recomendada é  10 a 20 ppm ou 10-20ug/ml dia  ou  10-20mg/litro dia  ou   10000ug/litro dia   ou    0,01mg/ml dia resumindo.

1 A 25 ML DE PRATA COLOIDAL  (conforme o patógeno ) DE 15 A 20 PPM, para uma pessoa com média de peso de 70 kg, uma vez ao dia pela manhã em jejum.

Casos graves de infecção deve-se iniciar com baixa dosagem (5ml) para evitar septicemia e ir aumentando a dosagem gradativamente, devido ao grau imediato de ação da prata coloidal verdadeira.

Casos de prevenção por 30 dias ,doses podem variar de quantidades menores que a indicada como 0,3ml a 5 ml dia conforme o sistema imunológico em baixa ou alta.

https://naturalsbrazil.blogspot.com.br/search?q=dosagem

NANOPARTICULA DE PRATA REVESTIDA COM SILICA ANTIBIÓTICO ELIMINA BATÉRIAS RESISTENTES

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NANOPARTICULA DE PRATA REVESTIDA COM SILICA ANTIBIÓTICO ELIMINA BATÉRIAS RESISTENTES
 
A sílica perfura a membrada das bactérias.
 
Nanopartícula revestida com antibiótico elimina bactérias resistentes
23 de maio de 2017
Karina Toledo | Agência FAPESP – Uma nova estratégia para combater bactérias resistentes a antibióticos foi descrita por pesquisadores brasileiros na revista Scientific Reports, do grupo Nature.
 
O método consiste em revestir nanopartículas feitas de prata e sílica – potencialmente tóxicas para os microrganismos e também para as células humanas – com uma camada de antibiótico. Desse modo, por afinidade química, o nanofármaco age apenas sobre os patógenos, tornando-se inerte ao organismo.
 
“Nós usamos o antibiótico como uma espécie de isca e, assim, conseguimos levar a nanopartícula até a bactéria com uma grande quantidade do fármaco. A ação combinada da droga com os íons de prata foi capaz de matar até mesmo microrganismos resistentes”, contou Mateus Borba Cardoso, pesquisador do Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM).
 
Apoiado pela FAPESP, o trabalho integra uma linha de pesquisa cujo objetivo é desenvolver sistemas para tornar seletiva a ação de nanopartículas.
 
Em artigos anteriores, o grupo mostrou que a estratégia pode ser viável para o tratamento do câncer, levando o quimioterápico às células tumorais e poupando as sadias (agencia.fapesp.br/23210). Pode também ser experimentada na inativação do vírus HIV, causador da Aids, em bolsa de sangue para transfusão, por exemplo (agencia.fapesp.br/23779).
 
“Há medicamentos comerciais que contêm nanopartículas que, de modo geral, servem para recobrir o princípio ativo e aumentar o tempo de vida deste dentro do organismo. Nossa estratégia é diferente. Decoramos a superfície da nanopartícula com determinados grupos químicos que servem para direcioná-la até o local onde deve agir, de modo seletivo”, disse Cardoso.
 
No artigo mais recente, o grupo descreve a síntese de nanopartículas formadas por um núcleo de prata recoberto por uma camada de sílica porosa para permitir a passagem de íons. Na superfície, foram colocadas várias moléculas do antibiótico ampicilina em um arranjo que, segundo Cardoso, não foi feito ao acaso.
 
“Por meio de modelagem molecular, conseguimos determinar qual parte da molécula de ampicilina interage melhor com a membrana bacteriana. Deixamos então todas as moléculas do fármaco com essa parte-chave voltada para o lado externo da nanopartícula, aumentando as possibilidades de interação com o patógeno”, explicou.
 
O trabalho de modelagem molecular contou com a colaboração de Hubert Karl Stassen, do Instituto de Química da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS).
 
Avaliação de eficácia
 
O efeito do nanoantibiótico em comparação ao da ampicilina convencional foi avaliado em duas linhagens diferentes da bactéria Escherichia coli – integrante da flora intestinal de mamíferos que, em certas situações, pode causar intoxicação alimentar.
 
Na linhagem suscetível à ampicilina, praticamente 100% dos microrganismos morreram tanto com o fármaco convencional quanto com a versão combinada com a prata. Na linhagem resistente, porém, apenas o nanoantibiótico teve eficácia.
 
O passo seguinte foi testar o efeito sobre uma linhagem de células renais humanas. Enquanto a nanopartícula de prata e sílica sem o revestimento de ampicilina se mostrou extremamente tóxica, a ampicilina convencional e a versão combinada com a prata se mostraram igualmente seguras.
 
“As imagens de microscopia confocal mostram que, além de não ser tóxica, a nanopartícula revestida com ampicilina não interfere no ciclo celular. As fases da mitose seguem seu curso, sem qualquer alteração”, disse Cardoso.
 
Na avaliação do pesquisador, a mesma estratégia poderia ser usada no combate a outras espécies bacterianas que desenvolveram resistência a antibióticos. Também é possível variar o fármaco usado na superfície da nanopartícula, para tratar diferentes tipos de infecção.
 
Contudo, o sistema apresenta uma desvantagem: como prata e sílica são materiais inorgânicos, essas nanopartículas não são metabolizadas e tendem a se acumular no organismo.
 
“Ainda não sabemos onde ocorreria esse acúmulo e quais seriam os efeitos. Para descobrir, será necessário fazer testes em animais. De qualquer modo, continuamos aperfeiçoando o sistema de modo a torná-lo mais seguro”, disse Cardoso.
 
Uma das possibilidades é, no lugar da prata, colocar no núcleo um segundo antibiótico de espectro diferente. Outra opção seria desenvolver uma nanopartícula pequena o suficiente para ser excretada na urina.
 
De qualquer modo, na avaliação de Cardoso, o nanoantibiótico em sua forma atual poderia ser usado no tratamento de casos extremos, como o de pacientes com infecção hospitalar que não respondem aos antibióticos convencionais.
 
“O possível acúmulo de nanopartículas no organismo, nesses casos, seria um preço pequeno a pagar para evitar a morte”, disse. O grupo busca parceiros para a realização de testes em animais.
 
O artigo Defeating Bacterial Resistance and Preventing Mammalian Cells Toxicity Through Rational Design of Antibiotic-Functionalized Nanoparticles (doi:10.1038/s41598-017-01209-1), de Jessica Fernanda Affonso de Oliveira, Ângela Saito, Ariadne Tuckmantel Bido, Jörg Kobarg, Hubert Karl Stassen e Mateus Borba Cardoso, pode ser lido em http://www.nature.com/articles/s41598-017-01209-1.
 
FAPESP
 

TESTE QUE DEMONSTRA A IMPORTÂNCIA DO TAMANHO E QUALIDADE DA PRATA COLOIDAL, NÃO CONTENDO PRATA IÔNICA PARA CUIDADO COM A SAÚDE

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Fonte de citotoxicidade em suspensão de nanopartículas de prata coloidal.
 
Abstrato
 
As nanopartículas de prata (AgNPs) são cada vez mais utilizadas em uma variedade de aplicações devido à sua potencial atividade antimicrobiana e suas propriedades plasmônicas e de condutividade.
 
Neste estudo, investigamos a fonte de citotoxicidade, genotoxicidade e produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) em linhagens celulares de fibroblastos humanos e câncer de pulmão humano (A549) por exposição a suspensões coloidais de AgNP preparadas com o mais simples e mais comumente usado Lee– Método de Meisel com uma variedade de tempos de reação e as concentrações do agente redutor.
 
As AgNPs sintetizadas com tempos de reação mais curtos foram mais citotóxicas e genotóxicas devido à presença de algumas sementes AgNP do tamanho de nanômetros. As suspensões preparadas com uma concentração de citrato aumentada não foram citotóxicas, mas induziram maior geração de EROs nas células A549 devido à alta concentração de citrato .
 
A genotoxicidade da suspensão diminuiu significativamente nas maiores concentrações de citrato. A análise de ambas as imagens de microscopia eletrônica de transmissão das áreas de gotículas secas das suspensões coloidais e os dados de toxicidade indicaram que as sementes de AgNP foram a principal fonte de toxicidade. A conclusão da etapa de nucleação e a formação de AgNPs maiores diminuíram efetivamente a toxicidade.
 
Fonte pesquisa: Instituto de ciências biológicas do Governo dos Estados Unidos
 
RESUMO
 
Foi testada a prata em casos que causou câncer pulmonar, pois a ingestão de prata coloidal com prata iônica com perda de ión, causou o estrago ao longo do tempo.
 
A pesquisa diz que foi usado o método Lee– Método de Meisel , que consiste no uso de citrato de sódio em suspensões de prata coloidal para eliminar essa concentração de prata iônica na suspensão durante o método de preparo.
 
Assim, quanto depois de muitos testes com quantidade diferentes de citrato, comprovou-se que quanto mais citrato, mesmos riscos e a maior inibição da prata iônica. Esse método é usado pela industria para introduzir a prata em plásticos, tecidos, etc, de forma que se torne inofensiva e mantenha as partículas de prata suspensas puras sem perda de íons na solução.
 
Outro fator importante é o método correto e preciso, onde coloração, sabor, efeito tindhall e o teste do sal, garantam que você esteja usando a verdadeira prata coloidal e não mais um experiência de fundo de quintal.
 
Preste atenção no que você anda ingerindo, o maior responsável pela sua saúde é você, depois do dano causado, não há como voltar atrás.
 
Naturals Brazil

ATIVIDADE ANTITUMORAL DE NANOPARTÍCULAS DE PRATA NO MODELO DE TUMOR DE ASCITE DO LINFOMA DE DALTON

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(Enfermidade que atingiu Edson Celulari)

Muthu Irulappan Sriram , Selvaraj Barath Mani Kanth , Kalimuthu Kalishwaralal e Sangiliyandi Gurunathan
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Este artigo foi citado por outros artigos no PMC.

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Abstrato
A nanomedicina diz respeito ao uso de nanomateriais de engenharia de precisão para desenvolver novas modalidades terapêuticas e de diagnóstico para uso humano. O presente estudo demonstra a eficácia de nanopartículas de prata biologicamente sintetizadas (AgNPs) como um agente antitumoral usando linhas celulares de ascites de linfoma de Dalton (DLA) in vitro e in vivo. As AgNPs mostraram citotoxicidade dose-dependente contra células DLA através da ativação da enzima caspase 3, levando à indução de apoptose que foi confirmada através da fragmentação nuclear resultante. Toxicidade aguda, isto é, convulsões, hiperatividade e toxicidade crônica, como aumento do peso corporal e parâmetros hematológicos anormais, não ocorreram. As AgNPs aumentaram significativamente o tempo de sobrevivência no modelo de ratinho tumoral em cerca de 50% em comparação com os controlos do tumor. As AgNPs também diminuíram o volume de fluido ascítico em camundongos com tumor em 65%, retornando o peso corporal ao normal. A contagem elevada de leucócitos e plaquetas no fluido ascítico dos camundongos portadores de tumor foi levada para um intervalo quase normal. A análise histopatológica do líquido ascítico mostrou uma redução na contagem de células DLA em camundongos portadores de tumor tratados com AgNPs. Esses achados confirmam as propriedades antitumorais das AgNPs e sugerem que elas podem ser uma alternativa custo-efetiva no tratamento de câncer e distúrbios relacionados à angiogênese.

Palavras-chave: antitumoral, nanopartículas de prata, linfoma de Dalton, ascite
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Introdução
A nanobiotecnologia, um campo emergente da nanociência, utiliza sistemas nanobaseados para várias aplicações biomédicas. Este campo em rápido desenvolvimento da nanociência levantou a possibilidade de usar nanopartículas terapêuticas no diagnóstico e tratamento de cânceres humanos. 1 Partículas e moléculas em nanoescala são uma alternativa em potencial para o tratamento de doenças, pois elas têm efeitos biológicos únicos, baseados em sua estrutura e tamanho, que diferem dos medicamentos tradicionais de pequenas moléculas. 2 Nos últimos anos, várias empresas farmacêuticas obtiveram aprovação da Administração de Alimentos e Medicamentos dos EUA (FDA) para o desenvolvimento de medicamentos baseados em nanotecnologia. Espera-se que o mercado global de nanotecnologia médica atinja mais de US $ 3 bilhões nos próximos cinco anos. 3 Um relatório baseado em um estudo da European Science Foundation afirmou que há uma necessidade de grandes investimentos no desenvolvimento de novas ferramentas médicas baseadas em nanotecnologia para diagnósticos e terapias. 2

A prata era conhecida apenas como metal até o recente advento da era da nanotecnologia, quando se reconheceu que a prata poderia ser produzida na nanoescala. A prata metálica foi submetida a recentes tecnologias de engenharia, resultando em partículas ultrafinas, cujos tamanhos são medidos em nanômetros (nm) e possuem características e morfologias distintas. 4 , 5

Nanopartículas de prata (AgNPs) estão entre os nanoprodutos emergentes que ganharam crescente interesse no campo da nanomedicina devido às suas propriedades únicas e potencial terapêutico óbvio no tratamento de uma variedade de doenças, incluindo neovascularização da retina, 6 , 7 e síndrome de imunodeficiência adquirida devido a humanos vírus da imunodeficiência (HIV). 8 , 9 As AgNPs também são conhecidas pelo seu potencial antimicrobiano contra vários outros vírus, incluindo hepatite B, 10 vírus sincicial respiratório, 11 vírus herpes simplex tipo 1, 12 e vírus da varíola dos macacos. Demonstrou-se que 13 AgNPs e íons possuem atividade citotóxica intrínseca 14 , 15 e exibem um efeito antimicrobiano melhorado quando aplicados em estruturas de silício. 16 As nanopartículas de óxido de prata exibiram propriedades antitumorais em modelos de tumor de linfossarcoma Pliss transplantado quando administradas por injeção intravenosa na forma de dispersões aquosas. 17 Resultados de estudos microbiológicos indicam que a interação de íons de prata com moléculas de uma matriz lipoproteica extracelular aumenta a permeabilidade da membrana plasmática das células microbianas e, eventualmente, causa a sua morte. 18 As AgNPs são sintetizadas por meio de vários métodos físicos, químicos e biológicos. Embora os métodos químicos envolvam um procedimento muito simples, eles empregam agentes redutores químicos, como citrato, borohidreto ou outros compostos orgânicos, 19 , 20 que são tóxicos para os organismos vivos e, portanto, os tornam inadequados para uso médico, enquanto a síntese biológica ecológica envolve a formação de AgNPs por meio de redução enzimática com melhor controle sobre a forma e tamanho das nanopartículas.

AgNPs também se tornaram um componente comum em roupas, recipientes de alimentos, curativos, pomadas e revestimentos de implantes, 21 , 22 e alguns já receberam a aprovação do FDA. 23 Nanopartículas de prata inibem a angiogênese induzida pelo fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) em células endoteliais da retina bovina. 24 Estudos semelhantes comprovaram seu efeito inibitório na permeabilidade vascular induzida por VEGF, interleucina (IL) -1β, 25 e produto final de glicação avançada 26 em células endoteliais da retina. Os potentes efeitos antiangiogênicos e antipermeabilidade das AgNPs, juntamente com sua capacidade de deter a progressão tumoral em células de linfossarcoma Pliss, levaram ao estudo do efeito antitumoral de AgNPs em tumores ascíticos.

O objetivo do presente estudo foi determinar os efeitos de AgNPs biologicamente sintetizados na tumorigênese de linfoma de linfoma de Dalton (DLA) sob condições in vitro e in vivo.

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materiais e métodos
Reagentes e mídia
A estreptomicina e a penicilina foram adquiridas à Calbiochem (La Jolla, CA). O soro bovino fetal (FBS) foi comprado na Sera Laboratories International Ltd (Camarillo, CA). O kit de ensaio MTT foi comprado na Roche Diagnostics (Mannheim, Alemanha). O kit de ensaio da caspase 3 foi adquirido da Sigma (St. Louis, MO). O Meio Mínimo Essencial de Dulbeco Modificado por Ischoves (IMDM) foi adquirido à Clonetics® (Walkersville, MD). Pratos de cultura de tecidos e placas de 96 cavidades foram adquiridos à Falcon® (Franklin Lakes, NJ). Outros produtos químicos foram comprados da Sigma (St. Louis, MO), a menos que especificado de outra forma.

Linha celular
A linhagem de células DLA foi obtida do Amala Cancer Research Institute (Thrissur, Índia) e foi propagada em tumores transplantáveis na cavidade peritoneal de camundongos albinos suíços. As células recentemente aspiradas do peritônio de camundongo foram lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS) sob condições estéreis e sua concentração foi determinada usando um hemocitômetro antes do transplante. As células ascíticas coletadas assepticamente foram lavadas com meio IMDM suplementado com FBS 10%, penicilina 100 UI / mL e estreptomicina 100 mg / mL. As células DLA colhidas foram incubadas numa placa de Petri durante uma hora a 37 ° C em 5% de CO2 atmosférico, e as células não aderentes foram cultivadas e utilizadas para experiências in vitro.

Biossíntese e purificação de nanopartículas de prata
A síntese de AgNPs foi realizada com base em um método descrito em outro lugar. 27 , 28 Resumidamente, as células bacterianas foram cultivadas em caldo nutriente (100 mL) contendo extrato de carne bovina (1 g), cloreto de sódio (0,5 g) e peptona (1 g) por 24 horas. Após a incubação, as células foram colhidas por centrifugação (4000 xg, 10 minutos) e lavadas duas vezes com água destilada estéril. A síntese de AgNPs foi realizada tomando 1 g de Bacillus licheniformis úmido junto com 1 mM de AgNO 3 e fazendo a mistura de reação até 50 mL usando água desionizada em frascos de Erlenmeyer que foram então incubados em incubadora a 37 ° C por 24 horas. horas a 200 rpm.

As células dos frascos foram lavadas duas vezes com tampão fosfato 50 mM (pH 7,0) e ressuspensas em 5 mL do mesmo tampão. A ruptura ultra-sica das culas foi realizada com um processador ultrassico (Sonics Vibra Cell VC-505/220, Newtown, CT) ao longo de trs perodos de 15 segundos e com um intervalo de 45 segundos entre perodos. As amostras sonicadas foram extraídas e a solução resultante foi filtrada através de um filtro Millipore de 0,22 μm para remover os detritos celulares. As amostras sonicadas foram centrifugadas a 16.000 × g durante 30 minutos à temperatura ambiente.

Caracterização de nanopartículas de prata
A caracterização das AgNPs sintetizadas e purificadas foi realizada de acordo com os métodos descritos anteriormente. 29 Amostras para análise de microscopia eletrônica de transmissão (TEM) foram preparadas em grades TEM cobertas com carbono. Medições de TEM foram realizadas em um instrumento JEOL modelo 1200EX operado a uma voltagem de aceleração de 120 kV.

Ensaio de endotoxina
O Millipore H 2 O, utilizado em todas as nossas experiências, foi testado para endotoxinas utilizando o método do coágulo de gel de acordo com as instruções do fabricante (kit de ensaio de endotoxina LAL). A formação de um coágulo de gel quando a amostra foi tratada de acordo com as instruções do fabricante do kit, indicou a presença de endotoxina. Da mesma forma, antes do tratamento em ratos, a suspensão de nanopartículas em água desionizada foi verificada quanto a possível contaminação por endotoxinas.

Determinação da concentração de nanopartículas
A determinação precisa do tamanho e concentração de nanopartículas é essencial para a aplicação biomédica de nanopartículas. 30 A concentração de AgNPs a ser administrada em um nível nM foi determinada por um método que foi relatado anteriormente. 31 O cálculo foi o seguinte:

Inicialmente, o número médio de átomos por nanopartículas foi calculado usando a fórmula:

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Onde N = número de átomos por nanopartícula, π = 3,14, ρ = densidade de prata cúbica de face centrada = 10,5 g / cm 3 , D = diâmetro médio de nanopartículas = 50 nm = 50 × 10 −7 cm, M = massa atômica de prata = 107,868 g, N A = número de átomos por mole (número de Avogadro = 6,023 x 1023). Portanto, assumindo 100% de conversão de todos os íons de prata em nanopartículas de prata:

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isto é, N = 3837233.003, então a concentração molar da solução de nanopartículas foi determinada por:

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Onde C = concentração molar da solução de nanopartículas, N T = número total de átomos de prata adicionados como AgNo 3 = 1 M, N = número de átomos por nanopartícula (do cálculo acima), V = volume da solução de reação em L, N A = número de Avogadro (6,023 × 10 23 )

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Onde C = 2,606 x 10-7 M / L = 2600 nM / 10 mL. As concentrações requeridas foram posteriormente compostas pelos valores obtidos.

Ensaio MTT
O ensaio de redução do corante de brometo de 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2, 5-difeniltetrazólio foi realizado para determinar o efeito citotóxico das AgNPs em várias concentrações. O ensaio depende da redução do MTT pela desidrogenase mitocondrial, uma enzima presente nas mitocôndrias de células viáveis, para um produto azul de formazan. Resumidamente, as células DLA foram recentemente colhidas de ratinhos portadores de DLA, e a concentração de células foi ajustada para 1 x 10 5 células / mL e plaqueadas em placas de cultura de fundo plano de 96 poços com várias concentrações de AgNPs. Todas as culturas foram incubadas durante 24 horas a 37 numa incubadora humidificada. Após 24 horas de incubação (37 ° C, 5% de CO 2 em atmosfera úmida), 10 mL de MTT (5 mg / mL em PBS) foram adicionados a cada poço, e a placa foi incubada por mais quatro horas a 37ºC. ° C. O formazano resultante foi dissolvido em 100 mL de tampão de dissolução (fornecido como parte do kit) e a absorvância da solução foi lida a 595 nm utilizando um espectrofotómetro Multiwell de varrimento (Biorad, Modelo 680, Japão). Todas as determinações foram realizadas em triplicado. As concentrações de AgNPs mostrando uma redução de 50% na viabilidade celular (isto é, valores IC50) foram então calculadas.

Ensaio Caspase 3
As células foram lisadas com o tampão de lise fornecido no kit de ensaio de caspase 3 (Sigma, St. Louis, MO) e mantidas em gelo durante 15 a 20 minutos. O ensaio baseia-se na hidrólise do substrato peptídico, Ac-DEVD-pNA, pela caspase 3, resultando na libertação de Ac-DEVD e p nitroanilina (pNA) que absorvem luz significativamente a 450 nm. Resumidamente, para 1 mL da mistura reaccional, foram adicionados 10 mL do lisado celular de amostras tratadas juntamente com 980 mL de tampão de ensaio, seguido pela adição de 10 mL de substrato colorimétrico caspase 3 20 mM (Ac-DEVD pNA). Os lisados celulares das culas DLA tratadas com AgNP foram ent incubados a 37 com o substrato de caspase 3 durante duas horas e a absorvcia foi lida a 450 nm num espectrofotetro de ultravioleta Vis de feixe duplo (Shimadzu, Jap). O ensaio também foi realizado com células não induzidas e na presença de inibidor de caspase 3 para uma análise comparativa.

Ensaio de fragmentação de DNA
1 x IO6 células foram lisadas em 250 uL de tampão de lise celular contendo Tris HCl 50 mM, pH 8,0, ácido etilenodiaminotetracético 10 mM, NaCl 0,1 M e dodecil sulfato de sódio a 0,5%. O lisado foi incubado com 0,5 mg / mL de RNase A a 37 durante uma hora e depois com 0,2 mg / mL de proteinase K a 50 durante a noite. A extração de fenol desta mistura foi realizada e o DNA na fase aquosa foi precipitado em 25 μL (1/10 volume) de acetato de amônio 7,5 M e 250 μL (1/1 volume) de isopropanol. A eletroforese de DNA foi realizada em gel de agarose a 1% contendo 1 μg / mL de brometo de etídio a 70 V, e os fragmentos de DNA foram visualizados expondo o gel à luz ultravioleta, seguido da fotografia.

Manutenção de animais e transplante de tumores
Os estudos in vivo foram realizados em fêmeas de camundongos albinos suíços com idade entre 5 e 6 semanas, pesando 25 ± 5 ge alojados em gaiolas de policarbonato (cinco ratos por gaiola) a uma temperatura ambiente de 25 ± 2 ° C com uma luz de 12 horas. e ciclo escuro de 12 horas. Os camundongos foram alimentados com ração de roedores comercialmente obtida e água ad libitum . Permitiu-se que os animais se aclimatassem ao ambiente de laboratório e foram aleatoriamente sujeitos ao experimento. Todos os experimentos foram conduzidos conforme as diretrizes do comitê institucional de ética animal (509/01 / c / CPCSEA) e tiveram aprovação prévia do mesmo comitê. As linhagens de células DLA foram mantidas em modelos de camundongos por transplante seriado asséptico em camundongos albinos suíços de camundongos portadores de tumor após o décimo dia de indução de ascites.

Design experimental
Os camundongos foram divididos em quatro grupos, com seis animais em cada grupo: Grupo 1, camundongos não tumorais em branco (não tumorais, não tratados); Grupo 2, ratinhos de controlo de tumores (induzidos por tumores, n tratados); Grupo 3, camundongos induzidos por tumor tratados com AgNPs a uma concentração de 500 nM em solução aquosa via injeção intraperitoneal (IP) por 15 dias; e o grupo 4, ratos de controlo tratados com AgNP a uma concentrao de 500 nM.

Efeito de nanopartículas de prata no tumor ascítico
A concentração inibitória mínima (IC50) determinada pelo ensaio de MTT foi utilizada para as experiências in vivo. O AgNP entregue aos ratos foi realizado utilizando o IC50 obtido. Ratinhos tumorais no Grupo 3 foram tratados com AgNPs a uma concentração de 500 nM durante um período de 15 dias, e a sua capacidade para reduzir o volume do tumor e o número de células foi comparada com ratinhos de controlo de tumores do Grupo 2.

Determinação do tempo médio de sobrevivência e aumento percentual no tempo de vida
Os animais foram inoculados com 1 x 106 culas / ratinho no dia 0 e o tratamento com AgNPs comeu 24 horas ap o transplante. O grupo controle foi tratado com o mesmo volume de solução de NaCl a 0,9%. Todos os tratamentos foram administrados por 15 dias. O tempo médio de sobrevivência (MST) de cada grupo, consistindo de seis camundongos, foi anotado. A eficiência antitumoral das AgNPs foi comparada com a de 5-fluorouracil (Dabur Pharmaceuticals, Índia) 20 mg / kg / dia IP durante nove dias. O MST dos grupos tratados foi comparado com o grupo controle usando o seguinte cálculo:

Aumento da expectativa de vida = (T – C / C) × 100
onde T = número de dias que os animais tratados sobreviveram e C = número de dias que os animais de controlo sobreviveram.

Eutanásia de animais experimentais
Após a conclusão do tratamento experimental, todos os ratos foram privados de comida durante a noite e eutanasiados por deslocamento cervical sob anestesia com cetamina-xilazina. O líquido ascítico e amostras de sangue foram coletadas cuidadosamente para várias estimativas histológicas e hematológicas, respectivamente.

Análise hematológica
Amostras de sangue foram coletadas por punção intracardíaca após anestesia com cetamina-xilazina. O sangue total foi imediatamente coletado em frascos revestidos com etilenodiaminotetracético para exame de potencial toxicidade hematológica. A análise hematológica incluiu a determinação dos níveis de glóbulos brancos, glóbulos vermelhos e plaquetas, e medição da concentração e volume de hemoglobina corpuscular média utilizando um analisador hematológico automático (MS9 Differential Cell Counter 3 Part, HD Consortium, Índia).

Análise histológica
O líquido ascítico desempenha um papel crucial no DLA e é uma coleção de células pleomórficas com núcleos hipercromáticos que são aglomerados de células malignas. A viabilidade de células tumorais no fluido ascítico pode levar a um agravamento adicional da doença e, portanto, a morfologia e o número de células no fluido ascítico dos controles e camundongos tratados com tumor foram observados por análise histológica. O líquido ascítico foi cuidadosamente coletado dos dois grupos experimentais (Grupo 2 e Grupo 3) e fixado em uma concentração de 1 mL usando uma solução tampão de formalina neutra a 10%, embebida em parafina e cortada em seções de 5 μm de espessura. Os cortes foram corados com hematoxilina e eosina, examinados ao microscópio de luz e fotomicrografias obtidas.

Análise estatística
Os valores foram expressos como média ± desvio padrão (DP). A significcia estattica (5%) foi avaliada por anise de varicia de uma via (ANOVA) seguida pelo teste t de Student ( P <0,05, Graph Pad, San Diego, CA).

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Atividade antitumor da prata coloidal em células de câncer de mama humano MCF-7

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Fundo
A prata coloidal tem sido utilizada como agente antimicrobiano e desinfetante. No entanto, há poucas informações sobre seu potencial antitumoral. O objetivo deste estudo foi determinar se a prata coloidal teve efeitos citotóxicos em células cancerosas de mama MCF-7 e seu mecanismo de morte celular.
 
Métodos
Células de câncer de mama MCF-7 foram tratadas com prata coloidal (variou de 1,75 a 17,5 ng / mL) por 5 h a 37 ° C e 5% de atmosfera de CO 2 . A viabilidade celular foi avaliada pelo método de exclusão de azul tripano e o mecanismo de morte celular através da detecção de mono-oligonucleossomas usando um kit ELISA e ensaio TUNEL. A produção das atividades antioxidante NO, LDH, Gpx, SOD, CAT e Total foi avaliada por ensaios colorimétricos.
 
Resultados
A prata coloidal teve efeito citotóxico dose-dependente em células de câncer de mama MCF-7 por indução de apoptose, mostrou LD 50 (3,5 ng / mL) e LD 100 (14 ng / mL) (* P <0,05), diminuiu significativamente a LDH ( * P <0,05) e aumentou significativamente as atividades de SOD (* P <0,05). No entanto, a produção de NO e as atividades antioxidantes Gpx, CAT e Total não foram afetadas em células de câncer de mama MCF-7. PBMC não foram alterados pela prata coloidal.
 
Conclusões
Os presentes resultados mostraram que a prata coloidal pode ser um potencial agente alternativo para a terapia do câncer de mama humano.
 
 
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Atividade Citotóxica de Nanopartículas de Prata e Íons de Prata em Células de Câncer de Mama Humanas T47D Resistentes a Parentes e Tamoxifeno e seus Efeitos Combinados com Tamoxifeno contra Células Resistentes

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Estudos sobre aplicações biomédicas de nanopartículas estão crescendo com um ritmo acelerado. Na medicina, as nanopartículas podem ser a solução para a resistência a múltiplas drogas, que ainda é uma grande desvantagem na quimioterapia do câncer. No presente estudo, investigamos o potencial efeito citotóxico de nanopartículas de prata (Ag NPs) e íons de prata (Ag + ) em células T47D resistentes ao pai e ao tamoxifeno na presença e ausência de tamoxifeno. Ags NPs foram sintetizadas (<28 nm ) e o ensaio MTT foi realizado. Os valores de IC50 associados foram: 6,31 µg / ml para Ag NPs / células parentes, 37,06 µg / ml para Ag NPs / células resistentes ao tamoxifeno, 33,06 µg / ml para Ag + / células-mãe e 10,10 µg / ml para Ag + / células resistentes. Como uma experiência separada, o efeito de concentrações sub-inibitórias de Ag NP e Ag + na proliferação de células resistentes ao tamoxifeno foi avaliado em concentrações não tóxicas de tamoxifeno. Nossos resultados sugerem que, em concentrações não citotóxicas de nanomateriais de prata e tamoxifeno, as combinações de Ag + -tamoxifeno e Ag NPs-tamoxifeno ainda são citotóxicas. Esse achado pode ser de grande benefício potencial na quimioterapia do câncer de mama; já que doses muito menores de tamoxifeno podem ser necessárias para produzir o mesmo efeito citotóxico e os efeitos colaterais serão reduzidos.
 
Palavras-chave: Neoplasias mamárias, Quimioterapia, Citotoxicidade, Nanopartículas, Tamoxifeno
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Introdução
Os últimos anos testemunharam uma crescente atenção para o rápido desenvolvimento de todos os aspectos do que é chamado de “nanotecnologia”. A nanotecnologia é brevemente denominada “A capacidade de fabricar, caracterizar e manipular estruturas artificiais, cujas características são controladas ao nível nanométrico” ( 1 ). Isso pode envolver projeto, síntese e preparação de nanopartículas para criar produtos com novas propriedades ( 2 – 4 ). Nos últimos anos, tem havido muito interesse na aplicação de nanomateriais para fins biológicos. Esses materiais incluem nanopartículas ( 5 – 7 ), nanotubos ( 8 ), nanofios ( 9 ) e pontos quânticos ( 10 ). No entanto, as aplicações biomédicas de nanomateriais como agentes citotóxicos ou antimicrobianos, biossensores e carreadores de fármacos estão crescendo em ritmo acelerado ( 11 – 13 ).
 
Apesar de muitos esforços, a resistência a múltiplas drogas ainda é considerada uma grande desvantagem na quimioterapia do câncer, que tem sido objeto de experimentos exaustivos nessa área ( 14 ). Os mecanismos celulares subjacentes a esse fenômeno são bem discutidos anteriormente ( 15 ). Também é bem conhecido que um dos principais mecanismos subjacentes à resistência a drogas é baseado na expressão do gene MDR-1 que leva à formação de proteínas transportadoras de ABC ligadas à membrana, tais como as glicoproteínas-P ( 16 , 17 ). Mecanismos alternativos incluem processos de desintoxicação por enzimas do metabolismo do citocromo P450 e glutationa, mecanismos de reparo celular que reparam danos no DNA induzidos por drogas, e alteração de vias de sinalização apoptótica, de modo que as células poderiam resistir à apoptose induzida por drogas.
 
O tamoxifeno é um medicamento freqüentemente prescrito, amplamente utilizado em todos os estágios do câncer de mama ( 18 ). No entanto, a resistência ao tamoxifeno ainda é um grande problema que limita sua aplicação na quimioterapia do câncer de mama ( 19 , 20 ). De modo a reduzir a resistência ao tamoxifeno, foram feitos esforços prodigiosos em terapias de combinação de tamoxifeno e compostos diferentes, tais como o activador de junções de hiato ( 21 ). A terapia combinada de drogas e nanopartículas é promissora, uma vez que pode melhorar a penetração de drogas nas células tumorais, melhorar sua capacidade de direcionamento de tumores e reduzir seus efeitos colaterais ( 22 ). Recentemente, o efeito citotóxico de nanopartículas poliméricas carregadas com tamoxifeno foi investigado por Amiji e colaboradores ( 23 ).
 
As aplicações biológicas de nanopartículas de prata (Ag NPs) têm sido amplamente estudadas; propriedades antimicrobianas em particular ( 24 – 27 ). Sabe-se que as NPs ag são citotóxicas tanto para células normais como para células cancerígenas em mamíferos ( 28 ) e os modos de interacção de Ag NP foram investigados em diferentes sistemas procarióticos e eucarióticos ( 29 – 31 ). Os efeitos citotóxicos dos íons de prata (Ag + ) também foram relatados em diferentes linhagens celulares ( 32 , 33 ). No entanto, nenhuma expericia comparativa foi ainda realizada sobre os efeitos citoticos da combinao de nanomateriais de prata e tamoxifeno em linhas celulares de cancro. Além disso, juntamente com os promissores efeitos citotóxicos dos nanomateriais de prata, ultimamente tem sido levantada muita preocupação sobre a questão da segurança desses compostos devido aos efeitos tóxicos indesejáveis ​​dos NPs de Ag tanto na saúde humana quanto no meio ambiente ( 34 , 35 ).
 
Este estudo representa uma avaliação comparativa in vitro do efeito de Ag NPs e Ag + na viabilidade de dois subtipos de células; Linhagem celular de câncer de mama T47D humano e linhagem celular T47D resistente ao tamoxifeno. Além disso, o efeito citotóxico de concentrações sub-inibitórias de Ag NPs e Ag + em células resistentes ao tamoxifeno tanto na presença como na ausência de tamoxifeno foi investigado.
 
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Materiais e métodos
Materiais
RPMI-1640 e soro bovino fetal foram adquiridos da Gibco (Estados Unidos); Brometo de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difenil tetrazólio (MTT), tamoxifeno, penicilina e estreptomicina da Sigma (Reino Unido); e dextrose, nitrato de prata (AgNO3), hidróxido de sódio (NaOH), cloreto de hidrogénio (HC1) e isopropanol da Merck (Alemanha).
 
Síntese de NPs Ag
A redução química de uma solução aquosa de AgNO 3 é um dos métodos mais amplamente utilizados para a síntese de colóides Ag ( 36 ). Preparou-se uma solução aquosa contendo Ag + 0,5 mM adicionando 22,5 mg de dextrose a 100 ml de solução de AgNO3 (0,5 mM ). Esta soluo foi depois alcalinizada utilizando 20 de NaOH 0,1 N e tratada num forno de microondas durante 60 segundos para induzir a reduo de is meticos. A redução do Ag + por dextrose na solução foi monitorizada por amostragem do componente aquoso (2 ml ) e depois medindo os espectros ultravioleta-visíveis (UV-Vis) das soluções num espectrofotómetro de varrimento automático UV-Vis de feixe duplo (Labomed, Inc., Spectro UV-Vis Double PC, Modelo UVD-2950), operado a uma resolução de 2 nm . Além disso, as NPs de Ag foram caracterizadas por Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET) (pistola de emissão de campo Phillips CM200) e Espectroscopia de Energia Dispersiva (EDS). Para esta proposta, uma suspensão aquosa contendo os Ag NPs foi dispersa ultrasonicamente, e uma gota da suspensão foi colocada em redes TEM de cobre revestidas com carbono e seca sob uma lâmpada IR. Micrografias foram obtidas usando um TEM operado a uma voltagem de aceleração de 80 kV .
 
Linha celular e condições de cultura
A linhagem de células de câncer de mama humano T47D (ATCC HTB-133, Estados Unidos) foi comprada do National Cell Bank of Iran (Instituto Pasteur do Irã, Teerã, Irã). A sub-linha da linhagem celular de câncer de mama humano T47D resistente ao tamoxifeno foi oferecida pelo Laboratório de Pesquisa Molecular, Departamento de Farmacologia e Toxicologia da Faculdade de Farmácia da Universidade de Ciências Médicas de Teerã (Teerã, Irã) ( 37 ). A linha celular de cancro parental foi mantida em meio de cultura RPMI-1640 suplementado com 10% de soro bovino fetal, 100 U / ml de penicilina e 100 µg / ml de estreptomicina numa incubadora de células a 5% de dióxido de carbono (CO2) a 37ºC. A linha celular de cancro resistente ao tamoxifeno foi cultivada no meio descrito suplementado com 1 µM de tamoxifeno e mantida sob as mesmas condições de células cancerígenas progenitoras.
 
Ensaio de citotoxicidade
O ensaio baseado em MTT foi realizado de acordo com um método previamente descrito ( 38 ) por semeadura preliminar de 45.000 células cancerígenas num meio de crescimento de 100 µl na presença de concentrações crescentes de Ag NPs e Ag + (15, 20, 30, 40 , 45 e 50 / mL ) em placas de 96 pos, individualmente e subsequente incubao de culas a 37 em 5% de CO2 durante 48 h . As culas foram depois tratadas com 25 de MTT (5 mg / mL ) e incubadas a 37 durante 4 h . Células não tratadas foram usadas como controle. Após a dissolução dos cristais de formazano em HCl 0,04 N em isopropanol, as placas de 96 poços foram lidas num leitor de microplacas (Dynatech Laboratories, Inc, Estados Unidos) a 570 nm . Cada expericia foi repetida tr vezes e o ensaio MTT foi realizado em triplicado para cada expericia. A citotoxicidade foi calculada como a percentagem de culas vieis em diferentes concentraes de amostras relativamente culas de controlo (n tratadas). Também, a Concentração Inibitória Meia Máxima (IC50) foi calculada como a concentração requerida inibindo o crescimento de células tumorais em cultura em 50% em comparação com as células não tratadas.
 
Como uma experiência separada, o efeito de combinação de Ag NPs e Ag + foi estudado tanto na presença como na ausência de tamoxifeno, em células T47D resistentes ao tamoxifeno. As concentra�es sub-inibit�ias de Ag NP (2,5 � / mL ) e Ag + (1,5 � / mL ) foram determinadas por um ensaio preliminar de MTT em linhas celulares testadas. Os efeitos destas amostras foram investigados nas concentrações mencionadas acima sobre a proliferação de células T47D resistentes ao tamoxifeno cultivadas em ambos os meios de cultura contendo tamoxifeno (1 µM ) e sem tamoxifeno e a proliferação de células neste meio de cultura foi avaliada em diferentes intervalos de tempo de incubação (20, 40, 60, 80 e 100 horas ), utilizando o mesmo ensaio MTT, descrito anteriormente.
 
análise estatística
As diferenças na citotoxicidade celular foram comparadas usando o teste t de Student. Os valores de p <0,05 foram considerados significativos.
 
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Resultados
Síntese de nanopartículas de prata e sua caracterização
Neste estudo, os NPs Ag foram sintetizados utilizando o método de redução química descrito anteriormente ( 36 ). Os Ag NPs sintetizados foram subsequentemente caracterizados por espectroscopia UV-Vis ( Figura 1 ). Vale ressaltar que a técnica descrita acima, mostrou-se muito útil na análise de nanopartículas. Como ilustrado na Figura 1 , a forte banda de absorção com um máximo localizado a 420 nm foi causada pela formação de Ag NPs produzidos pela dextrose. Este pico é atribuído ao fenômeno plasmônico de superfície, que é bem identificado em várias nanopartículas metálicas com tamanhos variando de 2 nm a 100 nm ( 39 , 40 ). A inserção na Figura 1 é uma fotografia de colóides Ag preparados conforme.
 
 
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O QUE É A PRATA COLOIDAL

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Prata coloidal são partículas de prata 999 diluídas em água destilada pelo sistema eletrólise, onde a fonte deve ter voltagem e amperagem adequada para se obter partículas do tamanho correto.

Imagine que a prata foi micro ralada e o pó está na escala dos nanômetros, como não é possível ralar, a única forma de fazê-lo é através do processo de eletrólise, aplicando uma determinada voltagem e amperagem por um determinado tempo.

Se você faz de forma incorreta, você pode obter sais de prata como nitratos, cloretos, etc e a prata iônica com perda de íon (simplificando, as partículas perdem pedacinhos e podem se ligar a outros saís ou substâncias deixando de ser a prata coloidal verdadeira) e essa é prejudicial a saúde.

Assim a prata coloidal verdadeira, são partículas de prata em escala de nanômetros carregadas de eletricidade.

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